Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System - Manuale (Pagina 4)

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Leica Biosystems Bond Oracle HER2 IHC System Instructions for Use TA9145 IT-CE-Rev_E 18/06/2013
Stati Uniti. Nessuno di questi campioni di tumori è stato ottenuto da pazienti partecipanti ai
test clinici con Herceptin®. I risultati indicavano una concordanza del 92,34% in un'analisi
2x2 (intervalli di confidenza del 95% tra l'89,42% e il 94,67%) e dell'86,54% in un'analisi 3x3
(intervalli di confidenza del 95% tra l'82,95% e l'89,62%) tra i risultati delle due analisi.
Principio di procedura
Il Bond Oracle HER2 IHC System contiene componenti necessari per completare una
procedura di colorazione immunoistochimica per tessuti fissati in formalina e inclusi in paraffina.
In seguito all'incubazione con l'HER2 Primary Antibody pronto all'uso (clone CB11), il sistema
si avvale della tecnologia a polimeri compatti. La conversione enzimatica del cromogeno
aggiunto successivamente comporta la formazione di un prodotto di reazione visibile nel sito
antigenico. Le sezioni dei tessuti possono essere quindi controcolorate, disidratate, pulite
e montate. I risultati vengono interpretati con un microscopio luminoso. Vengono forniti dei
vetrini di controllo con quattro linee cellulari di tumore mammario umano fissate in formalina e
incluse in paraffina per convalidare le sedute di colorazione. Le quattro linee cellulari mostrano
l'espressione dell'oncoproteina HER2 alle intensità 0, 1+, 2+ e 3+. L'intensità di colorazione di
queste linee cellulari è correlata sia al carico di recettori dell'oncoproteina HER2 per cellula sia
alla condizione di amplificazione del gene HER2.
Il Bond Oracle HER2 IHC System (product code TA9145) è da utilizzare sul sistema di
colorazione avanzato, completamente automatizzato Leica Biosystems’ BOND.
Componenti forniti
I materiali sotto elencati (Tabella 1) sono sufficienti per colorare 150 vetrini (60 vetrini test
incubati con HER2 Primary Antibody, 60 vetrini test corrispondenti incubati con HER2 Negative
Control, 15 HER2 Control Slides incubati con HER2 Primary Antibody e 15 controlli del tessuto
positivo interno incubato con HER2 Primary Antibody). Il numero di test si basa sull'utilizzo di una
dispensa automatizzata di 150 µl per vetrino. Il kit fornisce materiale sufficiente per un massimo di
15 sedute di colorazione individuale BOND.
HER2 Control Slides,
(x15)
Sezioni di linee cellulari di tumore al seno umano fissate in formalina
e incluse in paraffina che mostrano l'espressione dell'oncoproteina
HER2 alle intensità di colorazione 0, 1+, 2+ e 3+ se colorate in base al
protocollo previsto. Queste sezioni vanno pienamente rispettate e non
richiedono ulteriore cottura.
HER2 Primary
Antibody, 13,5 ml
Contiene l'anticorpo IgG monoclonale del topo, pronto all'uso e
purificato per affinità, clone CB11 e 0,35% ProClin
™
950.
HER2 Negative
Control, 9 ml
Contiene IgG di topo pronto all'uso ad una concentrazione equivalente
all'HER2 Primary Antibody e 0,35% ProClin
™
950.
Peroxide Block,
22,5 ml
Contiene perossido di idrogeno al 3-4%.
Post Primary, 22,5 ml
IgG anti-topo di coniglio (<10 μg/ml) in soluzione salina tris tamponata
contenente 10% (v/v) di siero animale e 0,09% di ProClin
TM
950.
Polymer, 22,5 ml
IgG anti-coniglio di capra poli-HRP (<25 μg/ml) in soluzione salina tris
tamponata contenente 10% (v/v) di siero animale e 0,09% ProClin
TM
950.
DAB Part 1, 2,25 ml
Contiene 66 mM 3,3’-diamminobenzidine tetraidrocloruro, in una
soluzione stabilizzante.
DAB Part B (x2),
22,5 ml
Contiene ≤0,1% (v/v) di perossido di idrogeno.
Hematoxylin, 22,5 ml Contiene <0,1% di ematossilina.
Tabella 1. Component iBond Oracle HER2 IHC System