Leica Biosystems HER2 FISH System - 30 Test - Manuale (Pagina 14)

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Leica Biosystems Leica HER2 FISH System - 30 Test Istruzioni per l'uso TA9217 IT-CE-Rev_D 08/04/2013
eccessiva o incompleta può inoltre compromettere la corretta interpretazione dei risultati.
Una colorazione aspecifica dovuta ad una sonda non combinata ha un aspetto non compatto e
granulare, e può essere visualizzata sul sito di ibridazione previsto o lontano da esso. Utilizzate
cellule intatte per l'interpretazione dei risultati della colorazione. Le cellule necrotiche o
degenerate possono presentare una colorazione aspecifica (22). Una colorazione FISH inattesa
o variazioni nella colorazione possono essere il risultato di alterazioni nei livelli di espressione
dei geni codificanti. Qualsiasi cambiamento nei modelli di colorazione previsti deve essere
interpretato in associazione alle altre indagini diagnostiche. L'interpretazione della colorazione
deve essere completata da studi morfologici e dall'uso di materiali di controllo appropriati e va
valutata nel contesto della storia clinica del paziente e qualsiasi altro test diagnostico da parte
di un patologo qualificato.
L'esecuzione dell'analisi (ossia la valutazione dell'adeguatezza dei materiali di controllo)
e l'interpretazione di un'eventuale colorazione o la sua assenza devono essere condotte in
laboratori accreditati/autorizzati sotto la supervisione di un patologo competente ed esperto,
responsabile dell'intera valutazione dell'analisi di ibridazione in situ e della sua interpretazione.
I risultati falsi positivi nella FISH possono essere dovuti alla cross-reattività della sonda rispetto
alle altre sequenze di acido nucleico e/o ad un legame aspecifico. Devono essere impiegati e
documentati materiali di controllo appropriati, e i test dovrebbero tenere in considerazione tutte
le relative date di scadenza.
Viene inoltre osservata una variazione interpretativa e tecnica quando la FISH è utilizzata su
materiali derivati da una linea cellulare (23).
B. Limitazioni specifiche del prodotto
Questo prodotto non va utilizzato in nessun'altra analisi diagnostica a base di DNA.
Non sostituite i reagenti Leica HER2 FISH System - 30 Test con qualsiasi altro componente
fornito da Leica Biosystems o da altri produttori. Questo renderebbe nulla l'analisi. L'utilizzatore
deve convalidare eventuali variazioni rispetto alle procedure consigliate.
Si raccomanda di utilizzare durante l'analisi tessuti fissati soltanto con fissativi a base di
formalina. L'uso di qualsiasi altro tipo di fissativo renderà nulla l'analisi.
Le sezioni tissutali tagliate al di fuori dell'intervallo di spessore raccomandato non sono valide.
L'utilizzo di qualsiasi altro spessore per la sezione potrebbe rendere nulla l'analisi.
Concordanza clinica di Leica HER2 FISH System - 30 Test rispetto a
Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe Kit
Questo studio esaminava l'adeguatezza del Leica HER2 FISH System - 30 Test per essere
usato come ausilio nel determinare il trattamento con la terapia di Herceptin (trastuzumab).
Lo studio è stato concepito per esaminare la concordanza tra il Leica HER2 FISH System - 30
Test e un dispositivo diagnostico precedentemente approvato, l'Abbott Molecular PathVysion
HER-2 DNA Probe Kit, considerato come lo standard di riferimento per quest'analisi. Il criterio di
accettazione per il test era che il limite inferiore dell'intervallo di confidenza unilaterale 95% fosse
superiore al 90% tra il Leica HER2 FISH System - 30 Test e l'Abbott Molecular PathVysion HER-
2 DNA Probe Kit manuale, tra i casi di cancro al seno invasivo fissati in formalina e conservati
in paraffina (FFPE) positivi (amplificati) e negativi (non amplificati).
Lo studio è stato condotto come valutazione mascherata su tre siti di campioni clinici di carcinoma
mammario invasivo. A ciascun sito di indagine sono stati forniti blocchi di tessuti con carcinoma
mammario invasivo fissati in formalina e conservati in paraffina con livelli di espressione
dell'oncoproteina HER2 noti. Una coorte era formata da 300 campioni, rappresentati da 75 casi
IHC precedentemente classificati come 0/1+; 150 casi IHC precedentemente classificati come
2+; e 75 casi IHC precedentemente classificati come 3+, che sono stati selezionati e suddivisi
equamente tra i tre siti di indagine.
Tutti i casi sono stati colorati con l'Abbott Molecular PathVysion HER-2 DNA Probe Kit Assay manuale
secondo le istruzioni del produttore come specificato nella confezione. Le sezioni sequenziali di ogni