Hoefer SE640 - Manuale (Pagina 40)

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6. 0,375 M TrisCl, 0,1% SDS, pH 8,8
(Risoluzione gel overlay, 100 ml)
1,5 M Tris-Cl, pH 8,8 (Soln. #2)
0,375 M 25,0 ml
10% SDS (Soln. # 4) 3,5 mM 1,0 ml
H
2
O deionizzata a 100,0 ml
-O-
Saturo d’acqua n-butanolo
Agitare n-butanolo e H
2
O deionizzata in un imbuto separatore.
Rimuovere il acquosa (inferiore) di fase. Ripetere questa pro-
cedura diverse volte. Utilizzare la fase superiore.
-O-
Se una sovrapposizione interferisce con il protocollo preferito,
isolare il gel dall’ossigeno atmosferico ponendo un pettine
vuoto o risolvere gel precedente sul gel.
7. 2X Sample buffer di trattamento
(0,125 M TrisCl, 4% SDS, 20% glicerolo,
2% 2-mercaptoetanolo, pH 6,8, 10 ml)
0,5 M Tris-Cl, pH 6,8 (Soln. #3)
0,125 M 2,5 ml
10% SDS, 0,35 M (Soln. #4) 0.14 M 4,0 ml
Glicerolo (FW 92,09) 20% v/v 2.0 ml
2-mercaptoetanolo (FW 78,13) 2% v/v 0,2 ml
[-O- ditiotreitolo (DTT) 0,2 mM 0,31 g]
(FW 154,2)
Blu di bromofenolo (FW 691,9)
0,03 mm 0,2 mg
H
2
O deionizzata a 10,0 ml
Dividere in aliquote di 1.0 ml e conservare a -40 °C a -80 °C.
-O-
6X Sample buffer di trattamento
(0,35 M TrisCl, il 10% SDS, 30% glicerolo,
9.3% DTT, pH 6.8, ~10 ml)
0,5 M Tris-Cl, pH 6,8 (Soln. #3)
0,35 M 7,0 ml
SDS (FW 288,4) 0,35 M 1,0 g
Glicerolo (FW 92,09) 30% v/v 3.0 ml
DTT (FW 154,2) 0,6 M 0,93 g
Blu di bromofenolo (FW 691,9) 0,175 mM 1,2 mg
Dividere in aliquote di 1.0 ml e conservare a -70 °C.