Hoefer SE640 - Manuale (Pagina 35)

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Bands sono
inclinate o
distorte Gel preparazione
incompleta e di
polimerizzazione Degas l'impilamento-gel soluzione ed evitare bolle d'aria
sotto i denti del pettine.
Interfaccia irrego-
lare tra stacking e
l'esecuzione di gel Sovrapporre il gel esecuzione con acqua satura-butanolo
comincia prima della polimerizzazione, per evitare la
formazione di una superficie irregolare gel.
Preparazione del
campione Dializzare o desalificare del campione.
Campione Stained raccoglie:
Vicino alla parte
anteriore del
buffer Gel concentration Le molecole non sono sufficientemente limitata dalle
dimensioni del gel risoluzione dei pori: aumentare la% T.
Degradation Le proteine possono essere degradata da proteasi endo-
gene: utilizzare gli inibitori delle proteasi durante la fase di
isolamento.
Vicino alla parte
superiore del
gel quando il
fronte di buffer
ha raggiunto il
fondo Gel concentration La dimensione dei pori gel è troppo piccola: diminuire il T%
del (o sovrapposizione) gel risolvere.
Precipitation La proteina è precipitata. Riscaldare il campione ad una
temperatura inferiore (70 °C o meno) per 1-2 min.
A sia superiore e
inferiore del gel Gel concentration L'intervallo di peso molecolare del campione richiede un
gradiente di concentrazione di acrilamide per risolvere
l'intera gamma di dimensioni proteiche.
problema possibile causa rimedio
Monitoraggio
colorante non affi-
nare in una zona
concentrata nel gel
di impilamento Poor impilamento Versare un gel più alto impilamento. (Per ottenere risultati
ottimali, permettono un impilamento-gel altezza di 2,5 volte
l'altezza del campione nel pozzo.)
Qualità del reagente Smaltire le soluzioni obsolete di acrilammide e usare solo il
più alto grado di acrilammide.
Preparazione del
campione Durante la preparazione dei campioni, evitare di utilizzare
soluzioni con elevate concentrazioni saline.