Hoefer SE640 - Manuale (Pagina 19)

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Gel di acrilammide
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Preparare la soluzione di monomero e versare il gel
Preparare la quantità richiesta di soluzione di mono-
mero. Disaerare e aggiungere l’iniziatore e cataliz-
zatore appena prima di versare il gel. Pipettare la
soluzione in un angolo del sandwich, facendo attenzi-
one a non introdurre eventuali bolle d’aria. Vedi sotto
per il livello della soluzione appropriata a seconda
dell’applicazione.
No stacking gel (sistema continuo)
Riempire soluzione appena sotto il bordo superiore
della piastra superiore. Se le bolle sono in trappola,
rimuovere con una pipetta o una siringa. Introdurre
un pettine (con una leggera angolazione) in ogni
sandwich, facendo attenzione a non intrappolare bolle
d’aria sotto i denti.
Panino a più strati
Pipettare la soluzione in entrambi i panini,
riempiendo ciascuna allo stesso livello sotto il bordo
dentellato.
Stacking gel
Riempire soluzione di 3-4 cm sotto la parte superiore
della lastra di vetro. Questa altezza permette 1 cm di
gel di impilamento al di sotto del pozzetti. Versare il
gel e applicare un overlay (vedi punto 2). Dopo che
il gel è impostato, la preparazione del gel di impila-
mento come descritto di seguito.
2-D elettroforesi (proteine del sistema discontinuo)
Riempire soluzione di monomero di circa 1 cm sotto
la parte superiore della lastra di vetro per consen-
tire 4-5 mm per la striscia IPG o gel tubo e una
guarnizione agarosio. (Un gel di impilamento richie-
dono spazio extra). Sigillare la striscia IPG o gel tubo
in posizione con agarosio sciolto in tampone di corsa.
Fare attenzione a non intrappolare eventuali bolle
d’aria tra il gel prima e seconda dimensione.