Hoefer SE640 - Manuale (Pagina 24)

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Preparare il campione
Aumentare la densità del liquido campione con il
10% glicerolo o saccarosio. Aggiungi un colorante di
monitoraggio come il rosso fenolo, blu di bromofenolo,
o pironina Y.
Per gel SDS proteici, 2X tampone di utilizzare un
trattamento per denaturare entrambi i campioni secco
e liquido in una provetta.
Per soluzioni proteiche liquide, aggiungere un volume
uguale di 2X tampone.
Per asciugare campioni proteici, aggiungere volumi
uguali di 2X tampone campione e ad elevata purezza
per ottenere la concentrazione desiderata.
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Riscaldare il tubo in acqua bollente per 90 secondi,
poi lasciare raffreddare a temperatura ambiente.
Campioni trattati possono essere conservati a -40 a
-80 °C per le corse successive.
Proteine di membrana di calore a 60 °C per 20
minuti. Conservare campione inutilizzato a 4 °C.
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Underlay il campione nei pozzetti utilizzando una
punta fine microsiringa o gel-loading punta della
pipetta.
Tabella 1. Volume di campione per le misure standard
pettine, volume del campione (µl) per 1 mm di profondità
numero spessore pettine (mm)
di pozzi 0,75 1,0 1,5
10 6,2 8,3 12,4
12 5,8 7,7 11,5
15 4,3 5,7 8,6
20 3,1 4,1 6,2
28 2,1 2,7 4,1
1/1 (ref/prep) 4/90 6/121 9/183
1/2 (ref/prep) 4/85 6/112 9/171
Nota: Una volta che i campioni
nei pozzetti, fare attenzione a
non urtare i panini in modo che
i campioni non vengono sversati
o mescolato.