Hoefer HE33 - Manuale (Pagina 16)

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Rapidi, ad alta tensione piste
Alcune applicazioni, come ad esempio lo screening
dei campioni o il controllo della purezza del campio-
ne, può essere realizzato rapidamente in condizioni di
elevata tensione. Raffreddare la base (-20 °C) e limita-
re la corsa di 5 minuti o meno a 500 V.
Più lento, bassa tensione corre
Un gradiente di tensione di 12 V/cm (150 V) separa
da 0,1 a 23 kb frammenti di un Hind III digest di λ
DNA in 30 a 40 minuti (con 1% di gel di agarosio e
tampone TBE 0.5X in esecuzione). In alternativa, uti-
lizzando le stesse soluzioni, questo esempio potrebbe
essere eseguita a distanza di 24 V/cm (300 V) con
risoluzione in banda accettabile 20 a 30 minuti. Raf-
freddare la base prima dell’uso.
Tabella 1: le impostazioni di tensione e le
impostazioni di tempi di rodaggio †
tensione gradiente tempo
(V) (V/cm) (min)
500 40 5*
400 31 10*
300 24 20*
200 16 30 a 40
150 12 30 a 60
* Per i percorsi rapidi di 20 minuti o meno, utilizzare TBE
0.5X e raffreddare la base a -20 °C prima dell’uso.
† Tensione ed i tempi sono per l’1% agarosio NA, TBE 0.5X e
una base refrigerata.
Dopo la separazione

Importante! Spegnere l’alimentazione, scollegare i
cavi, e rimuovere il coperchio.

Se non è stato aggiunto bromuro di etidio al gel o
campione prima della corsa, macchia il gel in una
soluzione di 0,5-1,0 µg/ml bromuro di etidio in acqua
o tampone.

Pulire l’unità come descritto di seguito.
Nota: Per calcolare il
gradiente di tensione, dividere
l’impostazione della tensione
dalla distanza tra gli elettrodi
(12,7 cm).