Hoefer HE33 - Manuale (Pagina 15)

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L’elettroforesi corsa
Fare riferimento alle note, tamponi, e la sezione
dei volumi per ulteriori informazioni.

Raffreddare la base prima dell’uso, soprattutto se
valori più alti di tensione sarà utilizzato o durante la
separazione richiederà più di 30 minuti.
Nota: Per monitorare il progresso di separazione, o
aggiungere 0,5 µg/ml (conc finale). Di bromuro di
etidio al tampone di corsa ora, o aggiungere 50 µg/ml
(conc finale.) Bromuro di etidio al tampone campione.
Per visualizzare i propri progressi, spegnere l’alimen-
tazione, rimuovere il gruppo coperchio, e tenere una
lampada portatile UV vicino al gel.
L’aggiunta di bromuro di etidio al tampone di corsa
o del campione rallenta la migrazione leggermente.
Rilevamento con questo metodo non è sensibile come
la colorazione e la visualizzazione su un transillumina-
tore. (Vedi la rilevazione del DNA, pagina 15.)

Riempite entrambe le camere del buffer con tampone
di corsa fino a quando il buffer è ~1 mm di profondità
nel gel. (Questa operazione richiede circa 220 ml.)

Caricare i campioni. Aggiungere il campione al buffer
5X caricamento del campione e mescolare (1/5 del
volume finale è tampone di caricamento, vedere pagi-
na 14). Utilizzare una micro-pipetta per caricare ogni
campione, avendo cura di evitare la puntura del fondo
del pozzetto o intrappolare eventuali bolle.

Posizionare il coperchio in modo che il catodo (–)
cavo nero è più vicina alla fine del pozzetto. (Cam-
pioni di acido nucleico migrano verso l’anodo (+)
cavo rosso. Collegare i cavi colorati (rosso con rosso e
nero con nero) ad un alimentatore approvato, come il
PS300B. Impostare il livello di tensione e timer (se
disponibile) secondo il grado di risoluzione richiesta.
Attenzione: il bromuro di
etidio è un agente mutageno
conosciuto. Indossare sempre
guanti durante la manipolazione.
Indossare occhiali di protezione
UV e proteggono la pelle quando
si usa una lampada UV.
Nota: Se non colorante è stato
aggiunto al liquido refrigerante,
posizionare la base su uno
sfondo scuro per vedere i
pozzetti più facilmente.
Nota: al valore massimo l’unità
inizia il surriscaldamento non
appena la base raffreddata
raggiunge la temperatura
ambiente. Se il surriscaldamento
non è controllata, il gel si
scioglie e/o la base dell’unità
deformare!