Hoefer SE400 - Manuale (Pagina 42)

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Nota: poiché questo è un
metodo di colorazione altamente
sensibile, è importante
indossare i guanti durante
la manipolazione gel e usare
contenitori puliti. Per ridurre
il background, utilizzare solo
reagenti di elevata purezza e
rimuovere tutti i buffer da gel
durante la fasi di fissaggio e
decolorazione.
Coomassie protocollo Stain
A. gel Stain in soluzione colorante Coomassie a
temperatura ambiente per una notte. I gel possono
anche essere colorate rapidamente mettendoli
a 55 °C in un bagno d’acqua agitazione per
30-45 min.
B. Luogo gel in soluzione Decolorare I a temperatura
ambiente. Cambia la soluzione Decolorare quando
raggiunge un colore blu scuro finché i risultati
sfondo chiaro.
C. Conservare il gel in Decolorare soluzione II.
Per un metodo più sensibile, protocollo argento
macchia è raccomandato.
Argento protocollo Stain
(Adattato da Morrissey, 1981)
Agitazione Gentle è raccomandato durante tutta la
procedura.
A. Colorare il gel come al solito con Coomassie Blue.
Decolorare il gel con diversi cambiamenti di Decol-
orare soluzione II.
-Or-
Fissare il gel in 100 ml di soluzione Decolorare I per
30 minuti, quindi inserire il gel in 100-200 ml Decol-
orare soluzione II per 30 minuti. Scartare la soluzi-
one, riempire, e lavare con Decolorare soluzione II una
seconda di 30 minuti.
B. Trasferire il gel per reticolazione soluzione 100 ml
per 30 minuti.
C. Decantare la glutaraldeide e risciacquare il gel
con numerosi cambi di acqua deionizzata per un
periodo di due ore.
-Or-