Hoefer SE400 - Manuale (Pagina 37)

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Appendice A. Laemmli sistema gel
Tabella 4. Gel Laemmli - concentrazioni finali
tampone per
risolvere gel stacking gel elettroforesi
Acrilamide conc. 10% T*, 2,6% C 4% T, 2,6% C
Tris-Cl 0,375 M 0,125 M
Tris-Glycine 0,025 M Tris base
0,192 M glycine
pH 8,8 6,8 ~8,3
SDS 0,1% 0,1% 0,1%
APS † 0,05% w/v 0,05 – 0,1% w/v
TEMED ‡ 0,05% v/v 0,05 – 0,1% v/v
* Per ottenere qualsiasi altra operazione di concentrazione finale desid-
erata, regolare i volumi di acrilammide magazzino e acqua. Volumi per
diverse concentrazioni sono elencati nella Tabella 5.
† Ammonio persolfato.
‡ Tetrametiletilendiammina
Il sistema Laemmli è il protocollo più comune per
elettroforesi SDS-proteine denaturate. Lo ione leader
in questo sistema tampone è discontinuo e lo ione
cloruro finale è glicina. Di conseguenza, il gel e
risolvendo il gel di impilamento contengono Tris-Cl
(buffer di diversa concentrazione e pH), e il tampone
di elettroforesi contiene Tris-glicina. Tutti i buffer
contengono 0,1% SDS.
Gel poliacrilammide composizione è indicata da due
diverse percentuali:
La percentuale totale di acrilammide (% T) nel gel
risoluzione, che può variare da 4 a 20%, determina
la dimensione dei pori. Comunemente, la quantità
di reticolante usato (% C) è 2,6%. Nell’esempio
seguente sistema, la composizione gel risolvere è
10% T, 2,6% C, che si traduce in una dimensione di
pori media. La composizione stacking gel è del 4% T,
2,6% C. La T% in gel di impilamento è inferiore in
quanto una dimensione dei pori maggiore è richiesto.
Attenzione! L’acrilamide è una
neurotossina. Indossare sempre
i guanti quando si maneggia in
qualsiasi forma e indossare una
maschera durante la pesatura
della polvere. Mai bocca
pipettare la soluzione.
g(bisacrylamide)
g(acrylamide + bisacrylamide)
%C = × 100
g(acrylamide + bisacrylamide)
100 ml
%T = × 100