Hoefer SE300 miniVE - Manuale (Pagina 32)

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Blotter risoluzione dei problemi
problema soluzione
Trasferimento incompleto
Aree vuote sulla membrana
• Rimuovere tutte le bolle d’aria intrappolate nello
stack di trasferimento, fare attenzione particolarmente
grande in fase di montaggio risma per evitare che si
formino bolle d’aria, come ogni strato è collocato.
• Controllare la continuità elettrodo.
• Utilizzare un tampone inferiore forza ionica.
Molecole non migrano di gel • Aumentare l’intensità del campo.
• Aumentare il periodo di trasferimento. (Prova
raddoppio.)
• Non esporre il gel alle macchie o di fissaggio agenti
prima del trasferimento.
• Utilizzare un gel sottile.
• Ridurre la concentrazione di acrilamide gel.
• Per le proteine , utilizzare SDS 3,5 mM (0,1%) nel
tampone di trasferimento.
• Diminuire il metanolo nel tampone di trasferimento
proteina o ridurre la quantità al minimo. Tipicamente
10% metanolo è necessaria per il legame buona
membrane di nitrocellulosa.
• Aumentare la lunghezza di macchie di DNA di
tempo sono depurinated.
• Controllare il pH buffer. La maggior parte dei buffer
non deve essere titolato; fare tampone fresco.
• Per gel nativi, aumentare la carica netta sulla
proteina modificando ad un buffer di trasferimento
con un pH diverso. PH inferiore (<6-7) aumenta
la carica positiva di proteine , pH superiore (>6-7)
aumenta la carica negativa sulle proteine .