Hoefer SE300 miniVE - Manuale (Pagina 28)

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Preparare la pila di trasferimento
Trasferire il campione non appena possibile
dopo elettroforesi per minimizzare la diffusione
del campione all’interno del gel. Trasferimento
elettroforetico può essere eseguita come quat-
tro gel mini in una sola volta, se due gel sono
disposti in ciascuna delle due moduli.
La pila trasferimento composto gel e la
membrana, carta da filtro, e tre spugne imbal-
laggio. Il gel determina la dimensione della
membrana e di carta da filtro.

Per ogni gel, tagliare la membrana e due pezzi di
carta filtro della stessa dimensione del gel, ma non
maggiore di 8,5 × 10,5 cm.

Equilibrare il gel in tampone di trasferimento per
10 minuti.
Equilibrazione consente di gonfiare il gel o ridurre
prima entra in contatto con la membrana di trasferi-
mento e rimuove i sali tampone in eccesso e deter-
genti dal gel. Longer equilibrazione può provocare
bande diffuse.

Pre-umide membrane di nitrocellulosa o nylon in
acqua distillata, facendo attenzione a non intrappolare
bolle d’aria.
Dip un’estremità della membrana nel buffer e lenta-
mente immergerlo, permettendo di bagnare per azione
capillare.
Prelavaggio PVDF o altre membrane idrofobe in
metanolo.
Dopo il pre-bagnante, immergere tutti i tipi di
membrane in buffer di trasferimento per 2-5 minuti.

Bagnare i due pezzi di carta da filtro nel buffer di
trasferimento.
Importante! Prova a mettere
il gel correttamente la prima
volta. Le proteine può iniziare
a trasferire immediatamente.
Una volta che inizia il trasferi-
mento, spostando il gel alter-
are i risultati o causare bande
ombra sul blot.