Hoefer SE900 - Manuale (Pagina 33)

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9. 1% Agarosio in 1X tampone di elettroforesi
(100 ml)
In un pallone da 500 ml aggiungere:
Agarosio
1 g
Elettroforesi Buffer 10X (Soluzione #8) 10 ml
H
2
O deionizzata 90 ml
Blu di bromofenolo 3 mg
Mescolare delicatamente la sospensione di agarosio.
Riscaldare a bassa potenza in un forno a microonde fino agarosio è
completamente disciolto.
Dividere in provette da ~1,5 ml a vite in plastica top.
Conservare in aliquote a 4 °C.
10. Gradient Gel Casting Solution di spostamento
(50% di glicerina a 0,375 mM TrisCl 8,8, 0,1% SDS, 200 ml)
Glicerolo 100 ml
1.5M TrisCl ph 8.8 (Soluzione #2) 50 ml
H
2
O deionizzata 50 ml
Blu di bromofenolo 3 mg
Mescolare bene.
11. SDS equilibrazione soluzione tampone
Questa soluzione viene utilizzata dopo IEF, prima e seconda dimensione
PAGE. Le strisce IPG vengono immersi in soluzione in eccesso per aumen-
tare il pH del tampone striscia in modo che sia adatta per PAGE, e per
rivestire le proteine in SDS uniformemente in modo che la loro migrazione
correttamente nel gel seconda dimensione.
Prepara 200 ml (6 M urea, 75 mM Tris-HCl pH 8,8, 29,3% glicerolo, 2%
SDS, 0,002% blu di bromofenolo)
Concentrazione finale Quantità
Urea (FW 60,06) 6 M 72,1 g
1.5M Tris-HCl, pH 8,8 soluzione stock 75 mM 10,0 ml
Glicerolo (87% w/w) 29,3% (v/v) 69 ml
SDS (FW 288,38) 2% (w/v) 4,0 g
Blu di bromofenolo 0,002% (w/v) 4 mg
H
2
O deionizzata per 200 ml
Aliquotare in aliquote da 30 ml e congelare a -20 °C o inferiore.
24 centimetri IPG richiedono 5 -10 ml per strip per passo equilibrio. Più
brevi strisce possibile utilizzare il volume proporzionalmente meno per passo
equilibrations.
Attenzione! SDS può causare la soluzione a
bollire quindi attenzione durante il riscalda-
mento ed evitare trabocchi.
Nota: le strisce IPG devono essere
equilibrati poco prima PAGE dimensin
secondo. Non equilibrare le strisce IPG
prima della conservazione a -20 °C.