Hoefer SE245 - Manuale (Pagina 7)

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Versare il gel
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Preparare la quantità richiesta di soluzione di mono-
mero. Disaerare e aggiungere l’iniziatore e cataliz-
zatore appena prima di versare il gel. Utilizzare una
pipetta per offrire la soluzione in un angolo del piatto,
facendo attenzione a non introdurre eventuali sacche
d’aria. Vedi sotto per il livello della soluzione appro-
priata a seconda dell’applicazione.
No stacking gel
Riempire soluzione appena sotto la parte superiore
della piastra dentata. Se formano sacche d’aria,
rimuovere con una pipetta o una siringa. Introdurre
un pettine (con una leggera angolazione) in ogni
sandwich, facendo attenzione a non intrappolare bolle
d’aria sotto i denti.
Stacking gel
Riempire soluzione di 3 cm sotto la parte superiore
della lastra di vetro rettangolare. Questa altezza
permette 1 cm di gel di impilamento al di sotto del
pozzetti. Versare il gel e applicare un overlay. Dopo
che il gel viene polimerizzato, la preparazione del gel
di impilamento come descritto di seguito.
2-D elettroforesi
Riempire soluzione a circa 1,5 cm al di sotto della
sommità della piastra di vetro rettangolare e applicare
una sovrapposizione. Questa altezza permette di
4-5 mm di spazio per l’IPG strip e un sigillo di
agarosio.
2
Sovrapposizione ciascun gel con un sottile strato di
acqua satura n-butanolo, acqua, o tampone gel diluito
per minimizzare l’esposizione della superficie superiore
della soluzione gel all’ossigeno. Fornire la soluzione
overlay lentamente da una siringa di vetro dotato di un
ago da 22. Applicare la soluzione vicino al distanzia-
tore e farlo fluire attraverso la superficie nudo.
3
Lasciare il gel per polimerizzare per un minimo di
un’ora.
Attenzione! L’acrilamide è
una neurotossina. Indossare
sempre guanti e osservare tutte
le procedure di laboratorio di
sicurezza.