Hoefer SE250 - Manuale (Pagina 25)

Appendice
Il seguente sistema Laemmli è leggermente
modificata per l'uso con i mini-unità verticali.
Il sistema Laemmli è il protocollo più comune
per elettroforesi SDS-proteine denaturate.
Lo ione leader in questo sistema tampone è
discontinuo e lo ione cloruro finale è glicina.
Di conseguenza, il gel e risolvendo il gel di
impilamento contengono Tris-Cl (buffer di
diversa concentrazione e pH), e il tampone di
elettroforesi contiene Tris-glicina. Tutti i buffer
contengono 0,1% SDS.
Gel poliacrilammide composizione è indicata da
due diverse percentuali:
% T = total acrylamide = g (acryl + bis) × 100
100 mL
% C = crosslinker = g (bis) × 100
g (acryl + bis)
La percentuale totale di acrilammide (% T)
nel gel di separazione, che può variare da 5
a 20%, determina la dimensione dei pori.
Comunemente, la quantità di reticolante usato
(% C) è 2,6%. Nel sistema seguente esempio,
la composizione gel risolvere è 10% T, 2,6% C,
che si traduce in una dimensione di pori media.
La composizione gel di impilamento al 4% T,
2,6% C. La T% in gel di impilamento è inferiore
in quanto una dimensione dei pori maggiore è
richiesto.
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SE250 risultati:
Lane 1: SDS-6H, alta MW
miscela standard, Sigma™
Lane 2: SDS-7 Dalton Mark
VII-L™, Sigma (10 microlitri
per corsia)
Gel
12% SDS PAGE macchiato con
Coomassie blu
Condizioni di funzionamento
20 mA, un'ora